Микробиом распределен в нашем организме неравномерно, принято различать микробиом кожи, полости рта, дыхательных путей, урогенитального тракта и кишечника.
Микробиом человека включает вирусы, археи, дрожжевые и другие грибки, но основную его часть составляют бактерии. У человека обитает 38 триллионов бактерий, 97% этих бактерий живут в толстом кишечнике.
У каждого человека свой уникальный набор микроорганизмов, почти как отпечаток пальца. Микробиом кишечника играет важную роль для здоровья. Микробиом человека постоянно меняется.
Формирование микробиома начинается с момента рождения. Сначала в нём доминируют бифидобактерии. С введением в рацион твёрдой пищи начинается формирование микробиома взрослого человека. С возрастом разнообразие бактерий снижается и количество лактобактерий и бифидобактерий уменьшается [4].
Микробиом кишечника на разных стадиях жизни.
Микробиом кишечника у младенцев.
Формирование микробиома начинается с первых дней жизни, когда новорожденный наследует бактерии от матери, особенно во время естественных родов.
В результате стремительного роста частоты оперативного родоразрешения мировые эксперты все больше обеспокоены негативным влиянием кесарева сечения на здоровье поколения детей в будущем. В последние годы появилось много исследований, доказывающих, что у детей, рожденных путем планового кесарева сечения, больший риск развития в отдаленной перспективе аллергических, аутоиммунных, метаболических, микробиотических и других расстройств по сравнению с детьми, рожденными естественным образом [8] [9].
Еще одной важной проблемой педиатрии сегодня является ожирение у детей.
Один из факторов метаболических нарушений – это плановое кесарево сечение. В 2015 г. представлен метаанализ 28 исследований, опубликованных в международных базах данных Medline, EMBASE и Web of Science. Показано, что риск ожирения у детей, рожденных путем планового кесарева сечения, на 39% выше по сравнению с детьми, рожденными вагинальным путем. При этом авторы отмечают, что не выявлено связи с избыточным весом матери или другими перинатальными факторами.
Одной из причин метаболических и других нарушений у детей считают различия в составе микробиоты кишечника детей рожденных путем планового кесарева сечения и вагинальных родов. Благодаря современным методам исследования, среди которых наибольшую популярность завоевал метод бактериальной идентификации путем секвенирования 16S-РНК, показано, что микробиота кишечника детей различается в зависимости от способа родоразрешения и вскармливания. Новорожденные, родившиеся естественным образом, имеют микробиоту, аналогичную их собственной матери.
Дети, рожденные путем кесарева сечения, имеют измененную микробную колонизацию. Она в основном представлена антибиотикустойчивыми штаммами бактерий. Выявлено меньшее количество и разнообразие Actinobacteria и Bacteroidetes и повышенный уровень Firmicutes в кишечнике. У младенцев, рожденных вагинально, превалируют Bifidobacterium, Bacteroides, Clostridium и Lactobacillus.
Авторы утверждают, что данные изменения сохраняются в исследованных группах до 3-месячного возраста и исчезают к 6 месяцам жизни при условии грудного вскармливания [5]. В других исследованиях показана высокая колонизация кишечника младенца больничными штаммами Citrobacter, Clostridium, Enterobacter [6], и данные изменения сохраняются у детей, не получавших грудного молока, длительно [7].
Важнейшими факторами, способствующими нормальной колонизации кишечника новорожденного, являются вагинальные роды и грудное вскармливание.
В последнем триместре беременности плод получает бактерии из амниотической жидкости, во время естественных родов из влагалища матери, а также с молозивом при прикладывании младенца к груди сразу после родов. Находящийся на грудном вскармливании ребенок ежедневно получает от 105 до 107 бактерий, находящихся в грудном молоке, на фоне чего формирует около 1012 колониеобразующих бактерий в толстой кишке в течение первого года жизни. Младенцы, рожденные преждевременно или путем кесарева сечения, имеют нарушенную фазу начальной колонизации, источником которых является окружающая и больничная среда с низким микробным разнообразием, часть из которых несет плазмиды, приводящие к формированию антибиотик-резистентности.
Новейшие данные о микробиоме кишечника позволили назвать его отдельным органом человека. Комменсальные бактериальные клетки оказывают стимулирующее действие на лимфоциты, стимулируют развитие ворсинок энтероцитов и межклеточных соединений, активируют высвобождение муцина из бокаловидных клеток кишечника, что положительно влияет на стабильность гликокаликса. Достаточная и своевременная колонизация кишечника Bifidobacteria ускоряет созревание секреторного иммуноглобулина А (sIgA), причем разнообразие штаммов Bifidobacteria достоверно коррелирует с уровнем sIgA в слюне в возрасте шести месяцев.
На сегодняшний день экспертами обсуждается стратегия снижения рисков и улучшения здоровья поколения в будущем [1].
Микробиом кишечника у взрослых.
Микробиом взрослых полностью сформирован и характеризуется богатством и разнообразием бактерий. Каждый человек имеет собственный микробиологический профиль. У взрослых микробиом играет важную роль в укреплении здоровья и иммунитета. И зависит от образа жизни.
Микробиота кишечника представляет собой сложную экосистему микроорганизмов, включая бактерии, вирусы, грибки и паразитов, которые преобладают в толстом кишечнике. Исследование коллекции микробных генов, показывает, насколько синергетичны отношения между человеком и микробом. Например, микробиота кишечника может вырабатывать ряд витаминов, включая все восемь витаминов группы В и нейротрансмиттеры, включая серотонин и норадреналин. Действительно, до трети метаболитов, обнаруживаемых в нашем кровообращении, вырабатываются нашими микроорганизмами (называемыми микробным метаболомом). Также было показано, что микробиота кишечника косвенно влияет на гормоны аппетита, такие как грелин и лептин, через энтероэндокринные клетки. Это подчеркивает, что микробиота кишечника может влиять на здоровье человека [2].
По мере взросления мы сталкиваемся с антибиотиками. Они изменяют состав кишечных бактерий и, таким образом, влияют на иммунный ответ и терапевтическую эффективность.
Микробиом кишечника во время беременности.
Во время беременности уровень прогестерона повышается, что негативно влияет на богатство микрофлоры в кишечнике. Этот гормон также стимулирует рост бифидобактерий и некоторых других микроорганизмов. От беременной женщины бактерии передаются ребёнку во время вагинальных родов и грудного вскармливания, помогая сформировать его микробиом.
Микробиом кишечника у пожилых людей.
Хронологический возраст человека не всегда соотносится с биологическим возрастом. Например, наблюдательные исследования у близнецов показали, что скорость биологического старения определяется не только генами. Многие исследования выявили факторы образа жизни, такие как чрезмерное воздействие солнечного света, стресс и курение, которые ускоряют биологическое старение.
Для микробиоты кишечника пожилых людей характерны меньшее разнообразие, доминирование определённых видов и уменьшение количества полезных микроорганизмов - лактобактерий и бифидобактерий. Эти изменения являются результатом постепенного изменения физиологии кишечника и питания.
Клетчатка в пожилом возрасте.
Было отобрано сорок два исследования, в одном из которых изучалось влияние добавок клетчатки в количестве 7-8 г в день на массу тела у 30 пациентов пожилого возраста. Испытуемые ежедневно употребляли продукты с добавлением овсяных отрубей в течение 12 недель или были отнесены к группе плацебо. Лечение клетчаткой из овсяных отрубей улучшило функцию кишечника, и, в отличие от группы, принимавшей плацебо, после приема клетчатки сохранялся средний вес тела (Sturtzel et al. 2009).
Появляется все больше доказательств того, что дисбаланс микрофлоры приводит к развитию различных неврологических и нейродегенеративных заболеваний [3].
Болезнь Паркинсона (БП) является хорошо изученным примером, когда предполагается, что этиология БП начинается в кишечнике. Интересно, что почти у 80% людей с БП возникают проблемы с запорами, которые часто предшествуют постановке диагноза БП на несколько лет [10]. Более того, некоторые кишечные бактерии даже были подтверждены как высокочувствительные биомаркеры для диагностики БП. Такие как Prevotellaceae, количество которых резко снижается после начала БП, и увеличение численности Enterobacteriaceae - свидетельствует о тяжести симптомов БП [11]. Интересно, что недавняя модель диагностики БП, использующая обилие Prevotellaceae и статус запора, продемонстрировала специфичность в 90,3% [11].
Этиология болезни Альцгеймера (AD) также тесно связана с микробиотой. Метаболические молекулы из микробиоты были связаны с фосфорилированными биомаркерами tau / Aβ42 AD, нагрузкой β-амилоидом и активацией пути воспаления NLRP3 [12] [13].
Накопление отложений Aβ, в свою очередь, катализирует высвобождение различных провоспалительных молекул, которые вызывают нейровоспаление при патологии AD [13].
Рассеянный склероз (РС) и расстройство аутистического спектра (РАС). Например, клиническое исследование микробного профиля кишечника у пациентов с рассеянным склерозом выявило повышенные уровни специфических микробных таксонов, включая Akkermansia muciniphila и Acinetobacter calcoaceticus, которые, как позже было обнаружено in vitro, способствуют усилению провоспалительного Т-клеточного ответа и ослаблению активности Tregs [14].
Кроме того, мыши, которым трансплантировали фекальную микробиоту (FMT) от пациентов с рассеянным склерозом, показали худшие экспериментальные фенотипы аутоиммунного энцефаломиелита (EAE) и меньшее количество противовоспалительных регуляторных Т-клеток, чем мыши, которые получали FMT от здоровых людей [13].
Между тем, исследования также отметили значительные различия в микробном составе между людьми с РАС и людьми без психических расстройств, включая снижение численности бифидобактерий, считающихся полезным видом, и увеличение численности клостридий, потенциально патогенного вида.
Микробиота кишечника важна для укрепления здоровья в целом, поскольку она поддерживает работу пищеварительной системы, иммунитет и метаболизм, а также влияет на процессы взаимодействия кишечника с мозгом.
Автор - Наталья Костенко. Член ОО НР. Нутрициолог (специалист по здоровому питанию).
ВК: @nataliia_kostenko
Telegram: @nataliia_kostenko7
Источники информации:
1. Журнал "Медицинский совет. Педиатрия" №17, 2018
https://remedium.ru/doctor/pediatrics/k ... ?PAGEN_3=2
2. British Nutrition Foundation
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ful ... /nbu.12405
3. https://www.thelancet.com/journals/ebio ... 5/fulltext
4. https://www.chr-hansen.com/ru/human-hea ... microbiome
5. Rutayisire E, Huang K, Liu Y, Tao F. The mode of delivery affects the diversity and colonization pattern of the gut microbiota during the first year of infants’ life: a systematic review. BMC Gastroenterol, 2016, 30, 16(1): 86. doi: 10.1186/s12876-016-0498-0.
6. Stokholm J, Thorsen J, Chawes BL et al. Cesarean section changes neonatal gut colonization.
J Allergy Clin Immunol, 2016 April.
7. Goedert JJ, Hua X, Yu G, Shi J. Diversity and composition of the adult fecal microbiome associated with history of cesarean birth or appendectomy: Analysis of the American Gut Project. EBioMedicine, 2014, 1(2–3): 167–172.
8. Sevelsted A, Stokholm J, Bonnelykke K, Bisgaard H. Cesarean section and chronic immune disorders. Obstetrical & Gynecological Survey, 2015, 135(1): 92-8.
9. Kim K et al. Cesarean section and disease associated with immune function. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2015, 137(2): 587-590.
10. Cersosimo M.G. - Benarroch E.E. Патологические корреляты желудочно-кишечной дисфункции при болезни Паркинсона. 46 2012; Нейробиологический дис.: 559-564
11. Scheperjans F. - Aho V. - Aho V. - et al. Микробиота кишечника связана с болезнью Паркинсона и клиническим фенотипом. 30 2015; Разлад в движениях.: 350-358
12. Shukla P.K. - Delotterie D.F - Xiao J. - et al. Изменения в оси кишечник-микроб-инфламмасома-мозг на мышиной модели болезни Альцгеймера. Клетки. 2021; 10
13. Honarpisheh P. - Reynolds C.R. - Blasco Conesa M.P. - et al. Нарушение гомеостаза кишечника наблюдалось до накопления бета-амилоида в мозге у мышей Tg2576. Первая Мировая научная конференция 2020; 21
14. Cekanaviciute E. - Yoo B.B. - Yoo B.B. - et al. Кишечные бактерии пациентов с рассеянным склерозом модулируют Т-клетки человека и усугубляют симптомы на мышиных моделях. 114 2017; Протокол Natl Acad Sci U S. A.: 10713-10718
Микробиом человека включает вирусы, археи, дрожжевые и другие грибки, но основную его часть составляют бактерии. У человека обитает 38 триллионов бактерий, 97% этих бактерий живут в толстом кишечнике.
У каждого человека свой уникальный набор микроорганизмов, почти как отпечаток пальца. Микробиом кишечника играет важную роль для здоровья. Микробиом человека постоянно меняется.
Формирование микробиома начинается с момента рождения. Сначала в нём доминируют бифидобактерии. С введением в рацион твёрдой пищи начинается формирование микробиома взрослого человека. С возрастом разнообразие бактерий снижается и количество лактобактерий и бифидобактерий уменьшается [4].
Микробиом кишечника на разных стадиях жизни.
Микробиом кишечника у младенцев.
Формирование микробиома начинается с первых дней жизни, когда новорожденный наследует бактерии от матери, особенно во время естественных родов.
В результате стремительного роста частоты оперативного родоразрешения мировые эксперты все больше обеспокоены негативным влиянием кесарева сечения на здоровье поколения детей в будущем. В последние годы появилось много исследований, доказывающих, что у детей, рожденных путем планового кесарева сечения, больший риск развития в отдаленной перспективе аллергических, аутоиммунных, метаболических, микробиотических и других расстройств по сравнению с детьми, рожденными естественным образом [8] [9].
Еще одной важной проблемой педиатрии сегодня является ожирение у детей.
Один из факторов метаболических нарушений – это плановое кесарево сечение. В 2015 г. представлен метаанализ 28 исследований, опубликованных в международных базах данных Medline, EMBASE и Web of Science. Показано, что риск ожирения у детей, рожденных путем планового кесарева сечения, на 39% выше по сравнению с детьми, рожденными вагинальным путем. При этом авторы отмечают, что не выявлено связи с избыточным весом матери или другими перинатальными факторами.
Одной из причин метаболических и других нарушений у детей считают различия в составе микробиоты кишечника детей рожденных путем планового кесарева сечения и вагинальных родов. Благодаря современным методам исследования, среди которых наибольшую популярность завоевал метод бактериальной идентификации путем секвенирования 16S-РНК, показано, что микробиота кишечника детей различается в зависимости от способа родоразрешения и вскармливания. Новорожденные, родившиеся естественным образом, имеют микробиоту, аналогичную их собственной матери.
Дети, рожденные путем кесарева сечения, имеют измененную микробную колонизацию. Она в основном представлена антибиотикустойчивыми штаммами бактерий. Выявлено меньшее количество и разнообразие Actinobacteria и Bacteroidetes и повышенный уровень Firmicutes в кишечнике. У младенцев, рожденных вагинально, превалируют Bifidobacterium, Bacteroides, Clostridium и Lactobacillus.
Авторы утверждают, что данные изменения сохраняются в исследованных группах до 3-месячного возраста и исчезают к 6 месяцам жизни при условии грудного вскармливания [5]. В других исследованиях показана высокая колонизация кишечника младенца больничными штаммами Citrobacter, Clostridium, Enterobacter [6], и данные изменения сохраняются у детей, не получавших грудного молока, длительно [7].
Важнейшими факторами, способствующими нормальной колонизации кишечника новорожденного, являются вагинальные роды и грудное вскармливание.
В последнем триместре беременности плод получает бактерии из амниотической жидкости, во время естественных родов из влагалища матери, а также с молозивом при прикладывании младенца к груди сразу после родов. Находящийся на грудном вскармливании ребенок ежедневно получает от 105 до 107 бактерий, находящихся в грудном молоке, на фоне чего формирует около 1012 колониеобразующих бактерий в толстой кишке в течение первого года жизни. Младенцы, рожденные преждевременно или путем кесарева сечения, имеют нарушенную фазу начальной колонизации, источником которых является окружающая и больничная среда с низким микробным разнообразием, часть из которых несет плазмиды, приводящие к формированию антибиотик-резистентности.
Новейшие данные о микробиоме кишечника позволили назвать его отдельным органом человека. Комменсальные бактериальные клетки оказывают стимулирующее действие на лимфоциты, стимулируют развитие ворсинок энтероцитов и межклеточных соединений, активируют высвобождение муцина из бокаловидных клеток кишечника, что положительно влияет на стабильность гликокаликса. Достаточная и своевременная колонизация кишечника Bifidobacteria ускоряет созревание секреторного иммуноглобулина А (sIgA), причем разнообразие штаммов Bifidobacteria достоверно коррелирует с уровнем sIgA в слюне в возрасте шести месяцев.
На сегодняшний день экспертами обсуждается стратегия снижения рисков и улучшения здоровья поколения в будущем [1].
Микробиом кишечника у взрослых.
Микробиом взрослых полностью сформирован и характеризуется богатством и разнообразием бактерий. Каждый человек имеет собственный микробиологический профиль. У взрослых микробиом играет важную роль в укреплении здоровья и иммунитета. И зависит от образа жизни.
Микробиота кишечника представляет собой сложную экосистему микроорганизмов, включая бактерии, вирусы, грибки и паразитов, которые преобладают в толстом кишечнике. Исследование коллекции микробных генов, показывает, насколько синергетичны отношения между человеком и микробом. Например, микробиота кишечника может вырабатывать ряд витаминов, включая все восемь витаминов группы В и нейротрансмиттеры, включая серотонин и норадреналин. Действительно, до трети метаболитов, обнаруживаемых в нашем кровообращении, вырабатываются нашими микроорганизмами (называемыми микробным метаболомом). Также было показано, что микробиота кишечника косвенно влияет на гормоны аппетита, такие как грелин и лептин, через энтероэндокринные клетки. Это подчеркивает, что микробиота кишечника может влиять на здоровье человека [2].
По мере взросления мы сталкиваемся с антибиотиками. Они изменяют состав кишечных бактерий и, таким образом, влияют на иммунный ответ и терапевтическую эффективность.
Микробиом кишечника во время беременности.
Во время беременности уровень прогестерона повышается, что негативно влияет на богатство микрофлоры в кишечнике. Этот гормон также стимулирует рост бифидобактерий и некоторых других микроорганизмов. От беременной женщины бактерии передаются ребёнку во время вагинальных родов и грудного вскармливания, помогая сформировать его микробиом.
Микробиом кишечника у пожилых людей.
Хронологический возраст человека не всегда соотносится с биологическим возрастом. Например, наблюдательные исследования у близнецов показали, что скорость биологического старения определяется не только генами. Многие исследования выявили факторы образа жизни, такие как чрезмерное воздействие солнечного света, стресс и курение, которые ускоряют биологическое старение.
Для микробиоты кишечника пожилых людей характерны меньшее разнообразие, доминирование определённых видов и уменьшение количества полезных микроорганизмов - лактобактерий и бифидобактерий. Эти изменения являются результатом постепенного изменения физиологии кишечника и питания.
Клетчатка в пожилом возрасте.
Было отобрано сорок два исследования, в одном из которых изучалось влияние добавок клетчатки в количестве 7-8 г в день на массу тела у 30 пациентов пожилого возраста. Испытуемые ежедневно употребляли продукты с добавлением овсяных отрубей в течение 12 недель или были отнесены к группе плацебо. Лечение клетчаткой из овсяных отрубей улучшило функцию кишечника, и, в отличие от группы, принимавшей плацебо, после приема клетчатки сохранялся средний вес тела (Sturtzel et al. 2009).
Появляется все больше доказательств того, что дисбаланс микрофлоры приводит к развитию различных неврологических и нейродегенеративных заболеваний [3].
Болезнь Паркинсона (БП) является хорошо изученным примером, когда предполагается, что этиология БП начинается в кишечнике. Интересно, что почти у 80% людей с БП возникают проблемы с запорами, которые часто предшествуют постановке диагноза БП на несколько лет [10]. Более того, некоторые кишечные бактерии даже были подтверждены как высокочувствительные биомаркеры для диагностики БП. Такие как Prevotellaceae, количество которых резко снижается после начала БП, и увеличение численности Enterobacteriaceae - свидетельствует о тяжести симптомов БП [11]. Интересно, что недавняя модель диагностики БП, использующая обилие Prevotellaceae и статус запора, продемонстрировала специфичность в 90,3% [11].
Этиология болезни Альцгеймера (AD) также тесно связана с микробиотой. Метаболические молекулы из микробиоты были связаны с фосфорилированными биомаркерами tau / Aβ42 AD, нагрузкой β-амилоидом и активацией пути воспаления NLRP3 [12] [13].
Накопление отложений Aβ, в свою очередь, катализирует высвобождение различных провоспалительных молекул, которые вызывают нейровоспаление при патологии AD [13].
Рассеянный склероз (РС) и расстройство аутистического спектра (РАС). Например, клиническое исследование микробного профиля кишечника у пациентов с рассеянным склерозом выявило повышенные уровни специфических микробных таксонов, включая Akkermansia muciniphila и Acinetobacter calcoaceticus, которые, как позже было обнаружено in vitro, способствуют усилению провоспалительного Т-клеточного ответа и ослаблению активности Tregs [14].
Кроме того, мыши, которым трансплантировали фекальную микробиоту (FMT) от пациентов с рассеянным склерозом, показали худшие экспериментальные фенотипы аутоиммунного энцефаломиелита (EAE) и меньшее количество противовоспалительных регуляторных Т-клеток, чем мыши, которые получали FMT от здоровых людей [13].
Между тем, исследования также отметили значительные различия в микробном составе между людьми с РАС и людьми без психических расстройств, включая снижение численности бифидобактерий, считающихся полезным видом, и увеличение численности клостридий, потенциально патогенного вида.
Микробиота кишечника важна для укрепления здоровья в целом, поскольку она поддерживает работу пищеварительной системы, иммунитет и метаболизм, а также влияет на процессы взаимодействия кишечника с мозгом.
Автор - Наталья Костенко. Член ОО НР. Нутрициолог (специалист по здоровому питанию).
ВК: @nataliia_kostenko
Telegram: @nataliia_kostenko7
Источники информации:
1. Журнал "Медицинский совет. Педиатрия" №17, 2018
https://remedium.ru/doctor/pediatrics/k ... ?PAGEN_3=2
2. British Nutrition Foundation
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ful ... /nbu.12405
3. https://www.thelancet.com/journals/ebio ... 5/fulltext
4. https://www.chr-hansen.com/ru/human-hea ... microbiome
5. Rutayisire E, Huang K, Liu Y, Tao F. The mode of delivery affects the diversity and colonization pattern of the gut microbiota during the first year of infants’ life: a systematic review. BMC Gastroenterol, 2016, 30, 16(1): 86. doi: 10.1186/s12876-016-0498-0.
6. Stokholm J, Thorsen J, Chawes BL et al. Cesarean section changes neonatal gut colonization.
J Allergy Clin Immunol, 2016 April.
7. Goedert JJ, Hua X, Yu G, Shi J. Diversity and composition of the adult fecal microbiome associated with history of cesarean birth or appendectomy: Analysis of the American Gut Project. EBioMedicine, 2014, 1(2–3): 167–172.
8. Sevelsted A, Stokholm J, Bonnelykke K, Bisgaard H. Cesarean section and chronic immune disorders. Obstetrical & Gynecological Survey, 2015, 135(1): 92-8.
9. Kim K et al. Cesarean section and disease associated with immune function. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2015, 137(2): 587-590.
10. Cersosimo M.G. - Benarroch E.E. Патологические корреляты желудочно-кишечной дисфункции при болезни Паркинсона. 46 2012; Нейробиологический дис.: 559-564
11. Scheperjans F. - Aho V. - Aho V. - et al. Микробиота кишечника связана с болезнью Паркинсона и клиническим фенотипом. 30 2015; Разлад в движениях.: 350-358
12. Shukla P.K. - Delotterie D.F - Xiao J. - et al. Изменения в оси кишечник-микроб-инфламмасома-мозг на мышиной модели болезни Альцгеймера. Клетки. 2021; 10
13. Honarpisheh P. - Reynolds C.R. - Blasco Conesa M.P. - et al. Нарушение гомеостаза кишечника наблюдалось до накопления бета-амилоида в мозге у мышей Tg2576. Первая Мировая научная конференция 2020; 21
14. Cekanaviciute E. - Yoo B.B. - Yoo B.B. - et al. Кишечные бактерии пациентов с рассеянным склерозом модулируют Т-клетки человека и усугубляют симптомы на мышиных моделях. 114 2017; Протокол Natl Acad Sci U S. A.: 10713-10718
